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miRNA分離純化試劑盒的使用方法

發布日期: 2022-08-20
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   miRNA分離純化試劑盒在高離序鹽狀態下選擇性吸附于miRNA/RNA吸附柱上,再通過一系列快速的漂洗-離心洗脫得到純凈的miRNA/RNA。無苯酚、氯仿DNA/RNA快速提取技術基礎上配合分離技術同時得到的miRNA/RNA/基因組DNA純度高,互不干擾。得到的miRNA/RNA不需要DNase消化,可直接用于反轉錄PCR、熒光定量PCR等實驗?;蚪MDNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各種試驗。
 
  使用方法:
 
  1.在純化好的100μL總RNA(含大RNA和小RNA)中,加入50μL溶液A,振蕩30秒混勻。如果RNA樣品體積不足100μL,可以用RNase-free水補足,如果體積超過100μL,可以用本公司核酸濃縮劑濃縮到100μL。
 
  2.室溫12000~15000g離心30分鐘。小RNA在上清中,大RNA在沉淀中。
 
   注意:離心時間不能短于30分鐘,否則大RNA沉淀不充分。
 
  3.小心將上清液轉移到干凈的1.5mLRNase-free塑料離心管中。留下的沉淀可以用75%乙醇洗滌后做大RNA電泳對照用。
 
  4.在上清液中加入200μL溶液B,振蕩30秒混勻。
 
  5.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心棄上清。由于溶液B中有惰性的助沉劑,所以得到的小RNA沉淀肉眼可見。
 
  6.加入1mL溶液C,震蕩數秒。
 
  7.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心棄上清。
 
  8.短暫離心數秒,小心吸棄殘留液體(約50μL左右)。
 
  9.在沉淀中(含小RNA)加入30~100μLRNase-free水,吹打溶解即得小RNA溶液。注意:不能只吹打管底部分,還需要吹打整個離心管管壁的離心面部分,因為上面也有有小RNA沉淀。
 
  10.最好先PAGE-銀染檢測小RNA純度再使用。
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