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免疫組化服務的相關問題解析

發布日期: 2022-10-23
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 免疫組化服務是通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及相對定量的研究。組織或細胞中凡是能作為抗原或半抗原,如蛋白質、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應的特異性抗體進行檢測。
1、出現非特異性背景染色怎么辦?  
(1)沖洗不充分解決:每步沖洗3×5  
(2)組織中含過氧化物酶未阻斷解決:可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時間延長  
(3)組織中含內源性生物素解決:正常非免疫動物血清再封閉  
(4)血清蛋白封閉不充分解決:延長血清蛋白封閉時間  
2、脫片產生的原因有哪些?  
(1)組織切的不好,切的不均勻。  
(2)時間短,溫度不夠。  
(3)操作不規范,有脫片嫌疑的片子最好不甩或輕輕甩,用衛生紙從邊緣上慢慢吸水。  
(4)抗原修復的時候高壓時間過長了。此外,用EDTA修復比檸檬酸容易脫片。  
(5)使用PBS的時候盡量用泡的,不要沖。  
3、染色陰性怎么辦?  
(1)操作步驟錯誤,重新試驗,設立陽性對照  
(2)組織中無抗原,設立陽性對照片,以驗證實驗結果  
(3)一抗與二抗種屬連接錯誤,仔細確定一抗與二抗種屬無誤  
4、蘇木素復染后氨水返藍怎么做?  
返藍可以用堿性溶液(PBS/Na2HPO4/淡氨水)或45度溫水.冷水藍化均可。一般藍化5~10min。
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