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快速蛋白質染色劑介紹5種經典使用方法

發布日期: 2022-09-19
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   在蛋白質染色方法中,考馬斯亮藍染色為常用,它克服了氨基黑染色靈敏度不高的限制,又比銀染簡便易操作??沙R幏椒ㄐ枋褂脛《镜募状己蛷姶碳ば缘囊宜?,難為了一眾小白們??焖俚鞍踪|染色劑廠家介紹蛋白質的含量測定有五種經典方法:
 
  1、凱式定氮法
 
  原理:蛋白質是含氮的有機化合物。蛋白質與硫酸和催化劑一同加熱消化,使蛋白質分解,分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定,根據酸的消耗量乘以換算系數,蛋白質含量。
 
  2、紫外吸收法
 
  原理:蛋白質分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm附近具有最大吸收,且各種蛋白質的這三種氨基酸的含量差別不大,因此測定280nm處的吸光度值可用于蛋白質含量的測定。
 
  3、雙縮脲法
 
  原理:雙縮脲是兩個分子脲經180°C左右加熱,放出一個分子氨后得到的產物。在強堿性溶液中,雙縮脲與CuSO4,形成紫色絡合物,稱為雙縮脲反應。凡具有兩個酰胺基或兩個直接連接的肽鍵,或通過一個中間碳原子相連的肽鍵,這類化合物都有雙縮脲反應。
 
  紫色絡合物在540nm處有最大吸收,顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量。
 
  4、Folin-酚試劑法
 
  原理:此法是雙縮脲法的發展,在堿性溶液中銅-蛋白質復合物還原磷鉬酸-磷鎢酸試劑(Folin試劑),.產生深藍色(鉬藍和鎢藍混合物)。在一定的條件下,藍色深淺與蛋白質的量成正比。
 
  5、考馬斯亮藍法
 
  原理:考馬斯亮藍G-250染料在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料的最大吸收峰的位置由465nm變為595nm,溶液的顏色也有棕黑色變為藍色,在595nm下測定的吸光度值與蛋白質的濃度成正比。
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